Μπορείτε επίσης να αφαλατώσετε το δείγμα σας με υπερδιήθηση στο 1 δέκατο του προηγούμενου όγκου, που να αραιωθεί ξανά και να επαναλάβετε το βήμα UF. Η καλύτερη μέθοδος αφαλάτωσης είναι η αφαλάτωση με διήθηση γέλης έναντι ρυθμιστικού διαλύματος 50 mM, από την υπερδιήθηση (κλασική, όχι φυγόκεντρη).
Τι είναι η αφαλάτωση στον καθαρισμό πρωτεΐνης;
Η αφαλάτωση χρησιμοποιείται για την αφαίρεση αλάτων από πρωτεϊνικά διαλύματα, φαινόλης ή μη ενσωματωμένων νουκλεοτιδίων από νουκλεϊκά οξέα ή περίσσεια αντιδραστηρίων διασύνδεσης ή επισήμανσης από συζευγμένες πρωτεΐνες.
Πώς καθαρίζετε τις πρωτεΐνες;
Στον καθαρισμό χύδην πρωτεϊνών, ένα κοινό πρώτο βήμα για την απομόνωση πρωτεϊνών είναι καταβύθιση με θειικό αμμώνιο (NH4) 2SO4. Αυτό πραγματοποιείται με την προσθήκη αυξανόμενων ποσοτήτων θειικού αμμωνίου και τη συλλογή των διαφορετικών κλασμάτων της καταβυθισμένης πρωτεΐνης. Στη συνέχεια, το θειικό αμμώνιο μπορεί να αφαιρεθεί με αιμοκάθαρση.
Πώς ρυθμίζετε τις πρωτεΐνες ανταλλαγής;
Ανταλλαγή ρυθμιστικού διαλύματος, ωστόσο, πραγματοποιείται με το πρώτα εξισορροπώντας με τη ρητίνη στήλης με το ρυθμιστικό διάλυμα στο οποίο θα πρέπει να καταλήξει το δείγμα. Και στις δύο περιπτώσεις, τα συστατικά του ρυθμιστικού διαλύματος που μεταφέρουν το δείγμα σε η στήλη θα αντικατασταθεί από τη λύση με την οποία η στήλη είναι προ-ισορροπημένη.
Ποια από τις παρακάτω τεχνικές χρωματογραφίας μπορεί να εφαρμοστεί για την αφαλάτωση πρωτεϊνών;
Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, διήθηση γέλης μπορεί να χρησιμοποιηθεί αποτελεσματικά για πρωτεΐνηαφαλάτωση και επιτυγχάνεται εξισορροπώντας πρώτα τη στήλη διήθησης γέλης με νερό. Ωστόσο, η ανταλλαγή ρυθμιστικού διαλύματος επιτυγχάνεται εξισορροπώντας πρώτα τη ρητίνη στήλης με το ρυθμιστικό διάλυμα στόχου.
