Είναι πολύ σημαντικό να γνωρίζετε ότι τα δεδομένα που παράγονται με ένα western blot συνήθως θεωρούνται ημιποσοτικά. Αυτό συμβαίνει επειδή παρέχει μια σχετική σύγκριση των επιπέδων πρωτεΐνης, αλλά όχι ένα απόλυτο μέτρο της ποσότητας.
Είναι το western blot ποιοτικό ή ποσοτικό;
Το
Western blot είναι μια αξιόπιστη ποσοτική μέθοδος μόνο εάν λαμβάνονται υπόψη οι ιδιότητες και η ακεραιότητα του δείγματος, η ειδικότητα αντισώματος στην πρωτεΐνη-στόχο και τα πρωτόκολλα φόρτωσης. Με ιδιαίτερη προσοχή στις λεπτομέρειες, μπορείτε να αποφύγετε κοινά λάθη και να αποφύγετε την παρερμηνεία των δεδομένων Western blot.
Τι τύπος μεθόδου είναι το western blot;
Ένα western blot είναι μια εργαστηριακή μέθοδος που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση συγκεκριμένων μορίων πρωτεΐνης μεταξύ ενός μείγματος πρωτεϊνών. Αυτό το μείγμα μπορεί να περιλαμβάνει όλες τις πρωτεΐνες που σχετίζονται με έναν συγκεκριμένο τύπο ιστού ή κυττάρου.
Μπορεί το western blot να ποσοτικοποιήσει;
Τα
Western blots ανιχνεύονται με αντισώματα ειδικά στην πρωτεΐνη-στόχο που είναι γνωστά ως πρωτογενή αντισώματα. … Ωστόσο, είναι επίσης δυνατή η χρήση Western blotting για την παροχή ακριβούς ποσοτικοποίησης των πρωτεϊνών στα δείγματα, για την αξιολόγηση των αλλαγών στα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης (2).
Μπορεί το western blot να ποσοτικοποιήσει τις πρωτεΐνες;
Μετά τη λύση των κυττάρων, είναι σημαντικό να προσδιοριστεί η συνολική συγκέντρωση πρωτεΐνης του δείγματος. Η ακριβής ποσοτικοποίηση του δείγματος θα σας επιτρέψει να φορτώσετε τοσωστή ποσότητα πρωτεΐνης σε κάθε λωρίδα.
