Τα δεδομένα πυκνομετρίας που δημιουργούνται για στυπώματα Western χρησιμοποιούνται συνήθως για τη σύγκριση της αφθονίας πρωτεΐνης μεταξύ των δειγμάτων. … Παρατηρήθηκαν μη γραμμικά δεδομένα πυκνομετρίας όταν ανιχνεύθηκαν στυπώματα Western με χρήση υπέρυθρου φθορισμού ή χημειοφωταύγειας και υπό διαφορετικές συνθήκες SDS-PAGE.
Τι είναι η πυκνομετρική ανάλυση;
Η
Πυκνομετρία είναι η ποσοτική μέτρηση της οπτικής πυκνότητας σε ευαίσθητα στο φως υλικά, όπως φωτογραφικό χαρτί ή φωτογραφικό φιλμ, λόγω έκθεσης στο φως.
Πώς χρησιμοποιείτε την πυκνομετρία στην εικόνα J;
Πυκνομετρία με χρήση ImageJ
- Κάντε κλικ στο κέντρο του τετραγώνου και σύρετέ το στην επόμενη λωρίδα. …
- Για την τελευταία λωρίδα, επαναλάβετε τη διαδικασία αλλά πατήστε Ctrl και 3 για να ορίσετε την τελευταία λωρίδα. …
- Χρησιμοποιήστε το εργαλείο γραμμής για να σχεδιάσετε τις γραμμές για να εξαλείψετε το φόντο της λωρίδας από τους υπολογισμούς. …
- Μεταβείτε στο: Analyse→ Gels→ Label Peaks για να λάβετε την αναφορά.
Πώς αναλύετε τα αποτελέσματα western blot;
Επικυρώστε τα εργαλεία ποσοτικοποίησης . Για παράδειγμα, εκτελέστε ένα blot όπου οι λωρίδες είναι φορτωμένες με 20 µg, 15 µg και 10 µg συνολικής πρωτεΐνης. Μετά την ανάλυση, η σχετική ποσοτικοποίηση των ζωνών-στόχων θα πρέπει να είναι 2, 1,5 και 1. Δοκιμάστε διαφορετικά εργαλεία και ρυθμίσεις ποσοτικοποίησης μέχρι να μπορέσετε να αναπαράγετε αξιόπιστα τα σωστά αποτελέσματα.
Πώς προσδιορίζετε ποσοτικά ένα western blot;
Βήμα 1: Προσδιορίστε την αφαίρεση του φόντουπυκνότητες της πρωτεΐνης που σας ενδιαφέρει (PI) και του ελέγχου κανονικοποίησης (NC). Βήμα 2: Προσδιορίστε το NC που έχει την υψηλότερη τιμή πυκνότητας. Βήμα 3: Διαιρέστε όλες τις τιμές NC με την υψηλότερη τιμή πυκνότητας NC για να λάβετε μια σχετική τιμή NC.