Όσο μεγαλύτερο είναι το μοριακό βάρος, τόσο μεγαλύτερο είναι το πηνίο και τόσο πιο αργά πηγαίνει το μόριο. Έτσι, η ηλεκτροφόρηση + SDS διαχωρίζεται με βάση το μοριακό βάρος, όχι με βάση το φυσικό φορτίο. Σημαντική σημείωση: Οι πρωτεΐνες του ίδιου μήκους συνήθως δεν μπορούν να διαχωριστούν με ηλεκτροφόρηση γέλης + SDS.
Πώς διαχωρίζετε τις πρωτεΐνες του ίδιου μοριακού βάρους;
Η φυγοκέντρηση, η ηλεκτροφόρηση και η χρωματογραφία είναι οι πιο κοινές τεχνικές για τον καθαρισμό και την ανάλυση πρωτεϊνών. Η φυγοκέντρηση διαχωρίζει τις πρωτεΐνες με βάση τον ρυθμό καθίζησής τους, ο οποίος επηρεάζεται από τη μάζα και το σχήμα τους.
Ποιες τεχνικές διαχωρίζουν τις πρωτεΐνες βάσει χρέωσης;
Οι πρωτεΐνες μπορούν να διαχωριστούν με βάση το καθαρό φορτίο τους με χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων. Εάν μια πρωτεΐνη έχει καθαρό θετικό φορτίο σε pH 7, συνήθως θα δεσμεύεται σε μια στήλη σφαιριδίων που περιέχουν καρβοξυλικές ομάδες, ενώ μια αρνητικά φορτισμένη πρωτεΐνη όχι (Εικόνα 4.4).
Ποια από τις παρακάτω τεχνικές ταιριάζει καλύτερα για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών με βάση το μοριακό βάρος;
Οι μέθοδοι χρωματογραφίας που βασίζονται στην κατανομή είναι πολύ αποτελεσματικές στον διαχωρισμό και την ταυτοποίηση μικρών μορίων ως αμινοξέων, υδατανθράκων και λιπαρών οξέων. Ωστόσο, οι χρωματογραφίες συγγένειας (δηλ. χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων) είναι πιο αποτελεσματικές στον διαχωρισμό μακρομορίων ως νουκλεϊκών οξέων και πρωτεϊνών.
Ποιος τύπος στήληςΗ χρωματογραφία διαχωρίζει τις πρωτεΐνες με βάση το μοριακό βάρος;
Χρωματογραφία διήθησης γέλης (GF) διαχωρίζει τις πρωτεΐνες αποκλειστικά με βάση το μοριακό μέγεθος. Ο διαχωρισμός επιτυγχάνεται χρησιμοποιώντας μια πορώδη μήτρα στην οποία τα μόρια, για στερικούς λόγους, έχουν διαφορετικούς βαθμούς πρόσβασης--δηλαδή, τα μικρότερα μόρια έχουν μεγαλύτερη πρόσβαση και τα μεγαλύτερα μόρια εξαιρούνται από τη μήτρα.
