Μπορείτε να αποθηκεύσετε το χωνεμένο πλασμίδιο;

2024 Συγγραφέας: Elizabeth Oswald | [email protected]. Τελευταία τροποποίηση: 2024-01-13 00:05

Το προϊόν της περιοριστικής πέψης μπορεί εύκολα να αποθηκευτεί στους -20 C. Στους 4 C θα ήταν εντάξει, αλλά για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει δραστηριότητα και δραστηριότητα αστέρων είναι συνιστάται να διατηρείται στους -20 C.

Πώς αποθηκεύετε το χωνεμένο DNA;

Δοκιμάστε να αποθηκεύσετε τη φέτα τζελ στο ψυγείο για μια νύχτα ή ακόμα και να λιώσετε τη φέτα σε ρυθμιστικό διάλυμα και να την καταψύξετε στους -20°C ή -80°C. Η αποικοδόμηση του DNA θα συμβεί με τον ίδιο ρυθμό και υπό τις ίδιες συνθήκες με το διαλυτό DNA, γι' αυτό χρησιμοποιήστε χαμηλότερη θερμοκρασία για μεγαλύτερη αποθήκευση.

Τι σημαίνει η πέψη ενός πλασμιδίου;

Καθαρισμένο πλασμιδικό DNA υποβάλλεται σε πέψη με 1 ή περισσότερα ένζυμα περιορισμού (REs) που επιλέγονται για να δώσουν ένα ξεχωριστό σχέδιο ζώνης DNA που αναλύεται εύκολα με ηλεκτροφόρηση. … Τυπικά επιλέγονται περιοριστικά ένζυμα που κόβουν την περιοχή πολλαπλής κλωνοποίησης (MCS) και καταλήγουν σε ένα διαγνωστικό μοτίβο 2-5 εύκολων αναλύσεων ζωνών.

Πώς αποθηκεύετε τα γραμμικά πλασμίδια;

Αν ανησυχείτε για τις κατάντη επιδράσεις του ΤΕ, αποθηκεύστε το DNA σε μια υψηλότερη συγκέντρωση και αραιώστε όταν χρειάζεται ή χρησιμοποιήστε "χαμηλό TE" που είναι 10 mM Tris / 0,1 mM EDTA. όταν το DNA ή το RNA είναι καθαρό, μπορεί να αποθηκευτεί στους -20 C για πολλούς μήνες χωρίς καμία αποικοδόμηση.

Πόσο καιρό μπορείτε να διατηρήσετε την πέψη περιορισμού;

Pro-Tip Ανάλογα με την εφαρμογή και την ποσότητα του DNA στην αντίδραση, ο χρόνος επώασης μπορεί να κυμαίνεται από 45 λεπτά έως όλη τη νύχτα. Για διαγνωστικές χωνεύσεις, 1-2 ώρες είναισυχνά αρκετές. Για πέψη με >1 μg DNA που χρησιμοποιείται για κλωνοποίηση, συνιστάται η πέψη για τουλάχιστον 4 ώρες.