Τα τεχνουργήματα διμερούς εκκινητή εμφανίζονται συνήθως σε έναν μεγάλο αριθμό κύκλου ορίου (συνήθως > 35 κύκλοι), ο οποίος είναι υψηλότερος από τον αριθμό κύκλου κατωφλίου για το επιθυμητό αμπλικόνιο. Τα διμερή εκκινητών αυξάνονται σημαντικά όταν προστίθεται ετερόλογο γονιδιωματικό DNA.
Πού θα βλέπατε διμερή εκκινητών σε ένα τζελ DNA;
Σε μη ποσοτική PCR τελικού σημείου, το διμερές εκκινητή θα εμφανιστεί ως ένα περισσότερο ή λιγότερο αχνό επίχρισμα σε ένα τζελ αγαρόζης, κάτω από τη ζώνη προϊόντος που μας ενδιαφέρει.
Πώς σχηματίζονται τα διμερή ασταριού;
Τα διμερή εκκινητών σχηματίζονται όταν δύο εκκινητές συνδέονται μεταξύ τους, αντί για το DNA του προτύπου, λόγω περιοχών συμπληρωματικότητας εκκινητών.
Πώς εντοπίζετε τα διμερή ασταριού;
Ο ευκολότερος τρόπος να ελέγξετε για διμερή εκκινητών είναι για να συγκρίνετε τις αντιδράσεις σας με τον αρνητικό έλεγχο (νερό αντί για DNA ή RNA). Τα διμερή ασταριού θα εξακολουθήσουν να σχηματίζονται στον αρνητικό μάρτυρα. Ορισμένα σετ ασταριών είναι πιο πιθανό να σχηματίσουν διμερή από άλλα.
Γιατί εμφανίζονται τα διμερή ασταριού;
Κυρίως διμερή εκκινητών παρατηρούνται λόγω της υψηλής συγκέντρωσης του εκκινητή στο μείγμα αντίδρασης PCR. Ή εάν δεν υπάρχει ενίσχυση PCR και μπορείτε να δείτε το διμερές εκκινητή στο τζελ αγαρόζης. Εάν μπορείτε να δείτε το προϊόν PCR, τότε μπορείτε να μειώσετε τη συγκέντρωση του πρώτου και να διατηρήσετε τις άλλες συνθήκες ίδιες.
